輔料的質檢通常是在新一批的輔料到實驗室后統一做一次或者定期(半年或1年)做,因此質檢就包含了驗貨和質檢2個部分。由于輔料的質檢沒有一個統一的標準,一般由各實驗室自行制定,可簡可繁,這里提出一些方法供大家參考和批評指正。
1.外包裝檢查:外包裝應完整無損無污,標識清楚,檢查品名、品牌,貨號,規格、生產日期,有效期、保存條件等信息。

2.內包裝檢查:內包裝物品應與外包裝標識一致,檢查是否有破損,泄漏,內容物是否齊全,是否有相應的使用說明書等。
3.性能質檢:檢測試劑耗材是否與其性能一致,比如吸頭的準確性和氣密性等
4.污染物質檢:檢測試劑耗材是否被常規檢測項目的待檢物污染,這種污染可能是物品生產環節,也可能是運輸或實驗室的保存過程中被污染。
5.抑制物質檢:檢測試劑耗材中是否存在PCR反應的抑制物,比如核酸酶。







(1)滲漏密閉性:將n個PCR管加入半量墨汁,蓋好蓋子后放入水中,浸泡30min,沒有墨汁滲出為合格。
(2)離心密閉性:將n個PCR管加入半量純水,放入離心機,1000 rpm,30min,管蓋未崩開未漏液為合格。
(3)熱密閉性:將n個PCR管加入半量純水,蓋好蓋子稱重后放入PCR儀,設置一個常用的PCR程序,程序運行完畢后,再進行稱重,PCR管未變形,管蓋未崩開未漏液,前后重量未變化為合格。
(4)冷密閉性:將n個PCR管加入半量純水,放入-20℃冰箱,24h,離心管未變形,管蓋未崩開未漏液為合格。
(5)污染物質檢:將n個PCR管加入半量陰性純水,蓋好蓋子渦旋1 min后靜置5min,作為模板進行擴增,qPCR無擴增為合格。
(6)抑制物質檢:將n個PCR管分別加入弱陽性質控物,室溫靜置5min,然后進行提取;RNA核酸,DNA核酸,室溫靜置5min,作為模板進行擴增,qPCR擴增未被抑制為合格。

(7)空白熒光通透性:對于qPCR,需要考察PCR管是否有非特異性熒光信號,將n個空PCR管,蓋好蓋子后放入PCR儀,設置一個常用的PCR程序,程序運行完畢后,qPCR無擴增為合格。
(8)陽性熒光通透性:對于qPCR,還需要考察PCR管是否會抑制熒光的通透性,將n個含弱陽性樣品和擴增試劑的PCR管,與確認無熒光干擾的PCR管,蓋好蓋子后放入PCR儀一同擴增,設置一個常用的PCR程序,程序運行完畢后,qPCR擴增未被抑制為合格。
需要注意以下問題:
實驗室使用的基因擴增儀,熒光定量PCR儀都是高精度儀器。一旦儀器出現一些溫度或者檢測上的小偏差,則很可能對實驗結果產生較大的影響。因此,學會日常保養和維護是尤為重要的。
1、儀器安置
儀器應安放在濕度較低、灰塵較少并遠離水源和熱源的地方,無腐蝕性氣體或強磁場干擾。
環境溫度建議在18~35℃之間。儀器之間應保持50cm 以上距離,降低儀器之間的影響。
2、樣品臺、熱蓋定期清潔
用95%乙醇配合棉簽、無塵布等工具,清潔樣品臺。之后運行PCR儀,設定保持溫度為50℃,約5~10min,讓殘余液體揮發去除。另外,熱蓋也應該用酒精或純水定期清洗,確保熱蓋清潔,溫控性能良好。對于熒光定量PCR,清潔樣品臺和熱蓋的同時,去除灰塵等雜物,保證光路清潔,降低信號干擾。
3. 使用前預熱
老款的PCR儀的性能比不上新款儀器,使用前需要進行預熱,不僅對儀器維護有好處,還能節約實驗時間。新款的儀器升溫快,但還是建議能在進行實驗前預熱2min,這樣可以有效延長儀器的使用壽命。
4. 定期運行維護
1.PCR儀器需要定期檢測,視制冷方式而定一般半年至少一次。
2.PCR反應的要求溫度與實際分布的反應溫度是不一致的,當檢測發現各孔平均溫度差偏離設置溫度大于1~2℃時,可以運用溫度修正法糾正PCR實際反應溫度差。

3.PCR反應過程的關鍵是升、降溫過程的時間控制,要求越短越好,當PCR儀的降溫過程超過60s,就應該檢查儀器的制冷系統,對風冷制冷的PCR儀要較地清理反應底座的灰塵;對其他制冷系統應檢查相關的制冷部件。
4.一般情況如能采用溫度修正法糾正儀器的溫度時,不要輕易打開或調整儀器的電子控制部件,必要時要請人員修理或利用儀器電子線路詳細圖紙進行維修。